LightNing® Esp3I (BsmBI)內切酶是壹(yi)系(xi)列經過(guo)基(ji)因工程(cheng)重組的(de)快速(su)限(xian)制性(xing)內切酶，適用(yong)於(yu)質(zhi)粒 DNA、PCR 產物(wu)或基(ji)因組 DNA 等的(de)快速(su)酶切。所(suo)有 LightNing® 快速(su)內(nei)切酶在通(tong)用的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有(you)優(you)良的(de)活性(xing)，能夠在 5~15 分鐘內完成(cheng)酶切。

LightNing® Esp3I (BsmBI)內切酶組成(cheng)

特性和用法

LightNing® Esp3I (BsmBI)內切酶，可在5~15 min內完成(cheng)反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩沖(chong)液；

37℃溫育；

參照(zhao)“DNA 快速(su)酶切流(liu)程"配制反(fan)應(ying)體系(xi)。

u失活條(tiao)件

80℃溫育20 min。

u甲(jia)基化敏感(gan)性

對(dui)於(yu)被(bei) CpG 對(dui)甲(jia)基化的(de) DNA，剪切可(ke)能受(shou)阻(zu)。

u儲(chu)運條(tiao)件

-20℃

相關(guan)問答(da)

Q:為什麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中加(jia)入HSA？

A:壹些酶在反(fan)應(ying)過(guo)程(cheng)中(zhong)需(xu)要HSA的(de)參與(yu)，我們在(zai)CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了HSA，避免反(fan)應(ying)中額(e)外添(tian)加(jia)組分(fen)，使(shi)得(de)酶切反(fan)應(ying)更加(jia)便捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加(jia)對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系(xi)列限(xian)制性(xing)內切酶的(de)功能會(hui)產生什麽(me)樣(yang)的(de)影響？

A:在我們的(de)測試中未(wei)曾發現HSA對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系(xi)列限(xian)制性(xing)內切酶的(de)功能有(you)任(ren)何(he)影響。在(zai)有些情況下(xia)，對(dui)於(yu)部(bu)分(fen)的(de)酶切反(fan)應(ying)有促進(jin)作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶切時(shi)間嗎(ma)？能夠延長反(fan)應(ying)時間嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列限(xian)制性(xing)內切酶經過(guo)改(gai)造(zao)可以將(jiang)酶切時(shi)間縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同樣(yang)也(ye)消(xiao)除了限(xian)制性(xing)內切酶的(de)星活(huo)性（長時間反(fan)應(ying)造(zao)成(cheng)的(de)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)消化），在說明書(shu)中告知(zhi)的(de)星活(huo)性出現的(de)時間範(fan)圍(wei)內可以適當(dang)延長反(fan)應(ying)時間。

Q:我什麽(me)時(shi)候(hou)應(ying)當考慮星活性(xing)對(dui)於(yu)酶切反(fan)應(ying)的(de)影響？

A:如果額(e)外的(de)酶切條(tiao)帶對(dui)於(yu)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)會(hui)產生影(ying)響時(shi)我們應(ying)當考慮星活性(xing)對(dui)於(yu)酶切反(fan)應(ying)的(de)影響。例(li)如：進(jin)行(xing)基因型、突(tu)變型分(fen)析(xi)或克(ke)隆(long)時我們應(ying)當避免星活性(xing)的(de)產生。避免星活性(xing)的(de)有效(xiao)方法：適當(dang)擴(kuo)大(da)反(fan)應(ying)體積(ji)（較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體積(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體積(ji)達(da)到或超(chao)過(guo)總(zong)反(fan)應(ying)體積(ji)的(de)5%）；不(bu)進(jin)行(xing)超長時間孵育（過(guo)夜(ye)消(xiao)化極易(yi)產生星(xing)活性(xing)）。

Q:有哪些關(guan)鍵(jian)因素(su)會導致星活性？

A:長時間孵育、過(guo)量(liang)的(de)酶、高甘(gan)油(you)含量（通常(chang)高於(yu)5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體系(xi)等因素(su)都(dou)會導致星活性的(de)產生。

Q:未經純化的(de)PCR產物(wu)直接(jie)酶切要(yao)怎樣(yang)設(she)定體系(xi)？

A:反(fan)應(ying)體系(xi)推薦(jian)由這些內(nei)容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制性(xing)內切酶、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶的(de)用量(liang)根(gen)據PCR產物(wu)的(de)濃度(du)而定，只加(jia)入2 μl反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的(de)原因是PCR反(fan)應(ying)中存(cun)在(zai)對(dui)應(ying)的(de)鹽離子和金屬(shu)離子，適當(dang)減少(shao)反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的(de)用量(liang)以保(bao)證(zheng)最終反(fan)應(ying)體系(xi)中的(de)環境適宜限(xian)制性(xing)內切酶發揮功能。

Q:限(xian)制性(xing)內切酶簡(jian)並(bing)性識別(bie)位點(dian)壹定(ding)是回(hui)文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大多數二型限(xian)制性(xing)內切酶的(de)識別(bie)序列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，而且(qie)是特定的(de)堿(jian)基(ji)序列(lie)。然(ran)而有(you)些限(xian)制性(xing)內切酶具有(you)簡(jian)並(bing)性識別(bie)位點(dian)，也就(jiu)是說(shuo)識別(bie)位點(dian)中有(you)壹個或以上的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是(shi)非(fei)特(te)異(yi)的(de)（例如(ru)：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於(yu)這(zhe)樣(yang)的(de)具有(you)簡(jian)並(bing)性識別(bie)位點(dian)的(de)限(xian)制性(xing)內切酶，只要(yao)是符(fu)合(he)要求(qiu)的(de)序列(lie)皆(jie)能被(bei)識(shi)別(bie)並且(qie)被正確地(di)切割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩個(ge)並不(bu)是回(hui)文(wen)的(de)，仍然能被(bei)BsrFI識別(bie)並且(qie)切割(ge)）。