LightNing® BglII內切(qie)酶是壹(yi)系列(lie)經(jing)過基(ji)因(yin)工(gong)程重(zhong)組(zu)的(de)快(kuai)速限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，適用(yong)於質粒 DNA、PCR 產物或基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速酶(mei)切(qie)。所有 LightNing® 快(kuai)速內(nei)切(qie)酶在通(tong)用的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優(you)良(liang)的(de)活性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘內完成酶(mei)切(qie)。

LightNing® BglII內切(qie)酶組(zu)成

特性和(he)用(yong)法(fa)

LightNing® BglII內切(qie)酶，可在5~15 min內完成反應(ying)

u建(jian)議反應(ying)條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液(ye)；

37℃溫育(yu)；

參照(zhao)“DNA 快速酶(mei)切(qie)流程(cheng)"配(pei)制(zhi)反應(ying)體系。

u失活條(tiao)件(jian)

不可熱(re)失活，請(qing)使用(yong)酚(fen)氯仿抽提或柱(zhu)純(chun)化(hua)。

u甲基(ji)化(hua)敏感(gan)性

對(dui)於被(bei) EcoBI 甲基(ji)化(hua)的 DNA，剪切(qie)可能(neng)受(shou)阻(zu)。

u儲運條(tiao)件(jian)

-20℃

相關問(wen)答

Q:為什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在反應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要HSA的參與，我們(men)在CutOne® Buffer中添加了(le)HSA，避免(mian)反應(ying)中額(e)外(wai)添加組(zu)分(fen)，使得(de)酶(mei)切(qie)反應(ying)更加(jia)便捷。

Q:HSA的添加對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的功(gong)能(neng)會產生什(shen)麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在我們(men)的測試(shi)中(zhong)未(wei)曾發(fa)現HSA對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的功(gong)能(neng)有(you)任何(he)影響(xiang)。在有(you)些(xie)情況(kuang)下(xia)，對(dui)於部分的酶切(qie)反應(ying)有促(cu)進(jin)作用(yong)。

Q:我需要嚴格(ge)遵(zun)守5~15 min的酶(mei)切(qie)時間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延(yan)長(chang)反應(ying)時間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶經(jing)過改(gai)造(zao)可以將酶(mei)切(qie)時間(jian)縮(suo)短至5~15 min。同樣(yang)也消(xiao)除(chu)了(le)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的星(xing)活性（長(chang)時間(jian)反應(ying)造成的(de)非(fei)特異性(xing)消(xiao)化(hua)），在說(shuo)明書(shu)中告(gao)知(zhi)的星(xing)活性出(chu)現的時間(jian)範(fan)圍內可以適當(dang)延(yan)長(chang)反應(ying)時間(jian)。

Q:我什(shen)麽(me)時候應(ying)當(dang)考(kao)慮(lv)星活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反應(ying)的影(ying)響(xiang)？

A:如果額(e)外(wai)的酶(mei)切(qie)條(tiao)帶對(dui)於實(shi)驗結果會產生影響時我們(men)應(ying)當(dang)考(kao)慮(lv)星活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反應(ying)的影(ying)響(xiang)。例如：進(jin)行基(ji)因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析(xi)或克隆時我們(men)應(ying)當(dang)避免(mian)星(xing)活性的(de)產生。避免(mian)星(xing)活性的(de)有效(xiao)方(fang)法(fa)：適(shi)當(dang)擴(kuo)大(da)反應(ying)體積（較小的反應(ying)體積容(rong)易(yi)造(zao)成甘(gan)油體積達(da)到或超過總(zong)反應(ying)體積的(de)5%）；不進(jin)行超長時間(jian)孵(fu)育(yu)（過(guo)夜消(xiao)化(hua)極易(yi)產生星活性）。

Q:有哪些(xie)關鍵(jian)因(yin)素(su)會導(dao)致(zhi)星活性？

A:長時間(jian)孵(fu)育(yu)、過(guo)量(liang)的(de)酶、高甘(gan)油含(han)量(liang)（通常(chang)高於(yu)5%）、較小的反應(ying)體系等因(yin)素(su)都會導(dao)致(zhi)星活性的(de)產生。

Q:未(wei)經(jing)純(chun)化(hua)的PCR產物直接(jie)酶切(qie)要怎樣(yang)設定(ding)體系？

A:反應(ying)體系推(tui)薦(jian)由(you)這些(xie)內(nei)容組(zu)成：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶的(de)用(yong)量根(gen)據(ju)PCR產物的濃(nong)度而(er)定(ding)，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)原(yuan)因是(shi)PCR反應(ying)中存(cun)在對(dui)應(ying)的鹽離(li)子和(he)金(jin)屬離(li)子，適(shi)當(dang)減少反應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)用(yong)量(liang)以保(bao)證(zheng)最終反應(ying)體系中(zhong)的(de)環(huan)境(jing)適宜限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶發揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶簡並性識別位(wei)點(dian)壹(yi)定(ding)是(shi)回文的(de)嗎(ma)？

A:大多(duo)數二型(xing)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的識(shi)別序列(lie)是(shi)回文的(de)，而(er)且(qie)是特定(ding)的(de)堿(jian)基(ji)序(xu)列(lie)。然而(er)有些(xie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶具有簡(jian)並性識別位(wei)點(dian)，也就(jiu)是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位(wei)點(dian)中有壹(yi)個(ge)或以上(shang)的堿(jian)基(ji)對(dui)是非(fei)特異的(de)（例如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這樣的(de)具有簡(jian)並性識別位(wei)點(dian)的(de)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，只要是符(fu)合要求的(de)序列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識(shi)別並且(qie)被(bei)正(zheng)確地(di)切(qie)割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩(liang)個(ge)並不是回文的(de)，仍(reng)然能(neng)被(bei)BsrFI識別(bie)並且(qie)切(qie)割）。