LightNing® AscI內切(qie)酶(mei)是壹系(xi)列經過基因(yin)工程重(zhong)組(zu)的快(kuai)速限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶，適用(yong)於質粒 DNA、PCR 產物或基因(yin)組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速酶切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速內切(qie)酶(mei)在(zai)通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有優(you)良(liang)的活(huo)性，能夠在(zai) 5~15 分鐘內(nei)完成(cheng)酶切。

LightNing® AscI內(nei)切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特(te)性和(he)用(yong)法(fa)

LightNing® AscI內(nei)切(qie)酶，可在(zai)5~15 min內(nei)完成(cheng)反(fan)應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶切(qie)流程"配制反(fan)應(ying)體系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲基化(hua)敏(min)感性

對於被(bei) CpG 甲基化(hua)的(de) DNA，剪(jian)切(qie)可能受阻(zu)。

u存(cun)儲條(tiao)件

-20℃

相(xiang)關問答

Q:為什(shen)麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶在(zai)反(fan)應(ying)過程中(zhong)需要HSA的(de)參(can)與(yu)，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加(jia)了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額(e)外(wai)添加(jia)組(zu)分，使得(de)酶切(qie)反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加對於雷霆系(xi)列限制性內(nei)切(qie)酶的功能會產生什(shen)麽(me)樣(yang)的(de)影響(xiang)？

A:在(zai)我(wo)們(men)的(de)測(ce)試中(zhong)未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於雷霆系(xi)列限制性內(nei)切(qie)酶的功能有任(ren)何(he)影(ying)響(xiang)。在(zai)有些情(qing)況下，對於部分的酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)有促進(jin)作用(yong)。

Q:我(wo)需要嚴(yan)格遵守5~15 min的(de)酶(mei)切時間嗎？能夠延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列限制性內(nei)切(qie)酶經過改造(zao)可以(yi)將酶切(qie)時間縮短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除了(le)限(xian)制性內(nei)切(qie)酶的星活(huo)性（長(chang)時間反(fan)應(ying)造成(cheng)的非特(te)異(yi)性消(xiao)化），在(zai)說(shuo)明書中(zhong)告(gao)知(zhi)的星活(huo)性出(chu)現的時(shi)間範(fan)圍(wei)內可以(yi)適當(dang)延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時間。

Q:我(wo)什(shen)麽(me)時(shi)候應當(dang)考(kao)慮(lv)星活(huo)性對於酶切反(fan)應(ying)的影(ying)響(xiang)？

A:如果額(e)外(wai)的酶(mei)切條(tiao)帶對於實(shi)驗結果會產生影(ying)響(xiang)時我(wo)們(men)應(ying)當(dang)考(kao)慮(lv)星活(huo)性對於酶切反(fan)應(ying)的影(ying)響(xiang)。例(li)如：進(jin)行基因(yin)型、突(tu)變型分析或(huo)克(ke)隆(long)時我(wo)們(men)應(ying)當(dang)避免(mian)星活(huo)性的(de)產(chan)生。避免(mian)星活(huo)性的(de)有效(xiao)方(fang)法(fa)：適當(dang)擴(kuo)大(da)反(fan)應(ying)體積(ji)（較(jiao)小的(de)反(fan)應(ying)體積(ji)容(rong)易造成(cheng)甘油(you)體積(ji)達(da)到或(huo)超過總(zong)反(fan)應(ying)體積(ji)的(de)5%）；不(bu)進(jin)行超長(chang)時間孵育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化極(ji)易產生星活(huo)性）。

Q:有哪(na)些關鍵因(yin)素(su)會導致星活(huo)性？

A:長(chang)時間孵育(yu)、過量的(de)酶(mei)、高甘(gan)油(you)含量（通常高於5%）、較(jiao)小的(de)反(fan)應(ying)體系(xi)等因素(su)都(dou)會導致星活(huo)性的(de)產(chan)生。

Q:未(wei)經純化的PCR產(chan)物直接(jie)酶(mei)切要怎樣(yang)設(she)定體系(xi)？

A:反(fan)應(ying)體系(xi)推(tui)薦(jian)由這些內容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的限制性內(nei)切(qie)酶、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶(mei)的(de)用量根(gen)據PCR產(chan)物的濃度而定，只(zhi)加入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖液(ye)的原因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存(cun)在(zai)對應的(de)鹽離子和金(jin)屬(shu)離(li)子，適當(dang)減少(shao)反(fan)應(ying)緩(huan)沖液(ye)的用(yong)量以(yi)保(bao)證最終(zhong)反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)的(de)環(huan)境(jing)適宜限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶發揮(hui)功能。

Q:限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶簡並性識別(bie)位(wei)點壹(yi)定是(shi)回文的嗎？

A:大(da)多數(shu)二(er)型限(xian)制性內(nei)切(qie)酶的識別(bie)序(xu)列是(shi)回(hui)文(wen)的，而且是特(te)定的(de)堿基序(xu)列(lie)。然(ran)而有些限(xian)制性內(nei)切(qie)酶具有簡並性識別(bie)位(wei)點，也(ye)就(jiu)是(shi)說(shuo)識別(bie)位(wei)點中(zhong)有壹個(ge)或以(yi)上(shang)的(de)堿(jian)基對是非(fei)特(te)異(yi)的(de)（例(li)如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這樣(yang)的(de)具有簡並性識別(bie)位(wei)點的(de)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶，只要是符合(he)要求(qiu)的序(xu)列(lie)皆能被(bei)識別(bie)並且(qie)被(bei)正(zheng)確(que)地切(qie)割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩(liang)個(ge)並不(bu)是回(hui)文的，仍然(ran)能被(bei)BsrFI識別(bie)並且(qie)切割(ge)）。