LightNing® AflII內切酶(mei)是壹(yi)系(xi)列(lie)經過基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組的(de)快速限(xian)制性(xing)內切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒 DNA、PCR 產物或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等(deng)的快速酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快速內切酶(mei)在(zai)通(tong)用的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有優(you)良的(de)活(huo)性(xing)，能夠在(zai) 5~15 分(fen)鐘內完(wan)成(cheng)酶(mei)切。

LightNing® AflII內切酶(mei)組成

特(te)性(xing)和用法

LightNing® AflII內切酶(mei)，可(ke)在(zai)5~15 min內完(wan)成(cheng)反(fan)應

u 建議(yi)反(fan)應條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照“DNA 快速酶(mei)切流程"配(pei)制反(fan)應體系。

u 失活(huo)條件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u 存(cun)儲條件(jian)

-20℃

相(xiang)關(guan)問(wen)答(da)

Q:為什(shen)麽在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在(zai)反(fan)應過程中需(xu)要(yao)HSA的(de)參與，我們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加了HSA，避(bi)免(mian)反(fan)應中額(e)外添(tian)加組分(fen)，使得酶切反(fan)應更加便捷。

Q:HSA的(de)添(tian)加對於雷霆(ting)系(xi)列(lie)限制性(xing)內切酶(mei)的功能會產生什(shen)麽(me)樣的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在(zai)我們(men)的測試(shi)中未曾(zeng)發(fa)現HSA對於雷霆(ting)系(xi)列(lie)限制性(xing)內切酶(mei)的功能有(you)任何影(ying)響(xiang)。在(zai)有(you)些情況下，對於部(bu)分(fen)的酶(mei)切反(fan)應有促(cu)進作(zuo)用。

Q:我需(xu)要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間嗎(ma)？能夠延(yan)長(chang)反(fan)應時間嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列(lie)限制性(xing)內切酶(mei)經過改(gai)造(zao)可以(yi)將(jiang)酶切時(shi)間縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣也消除(chu)了(le)限制性(xing)內切酶(mei)的星活(huo)性(xing)（長(chang)時(shi)間反(fan)應造成的非特異性(xing)消化(hua)），在(zai)說(shuo)明書(shu)中(zhong)告(gao)知的星活(huo)性(xing)出現的(de)時(shi)間範(fan)圍(wei)內可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)延(yan)長(chang)反(fan)應時間。

Q:我什麽時候(hou)應當(dang)考慮星活(huo)性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應的影響(xiang)？

A:如果(guo)額(e)外的(de)酶切條帶(dai)對於實(shi)驗(yan)結果(guo)會產生影(ying)響(xiang)時我們(men)應當考慮星活(huo)性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應的影響(xiang)。例如：進(jin)行(xing)基(ji)因(yin)型、突變(bian)型分(fen)析(xi)或(huo)克隆(long)時我們(men)應當避(bi)免(mian)星活(huo)性(xing)的產生。避(bi)免(mian)星活(huo)性(xing)的有(you)效方法：適(shi)當(dang)擴(kuo)大反(fan)應體積(ji)（較小(xiao)的反(fan)應體積(ji)容易(yi)造(zao)成甘(gan)油(you)體(ti)積(ji)達(da)到(dao)或超(chao)過(guo)總(zong)反(fan)應體積(ji)的5%）；不(bu)進(jin)行超(chao)長(chang)時(shi)間孵(fu)育(yu)（過(guo)夜(ye)消(xiao)化(hua)極(ji)易(yi)產生星活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關鍵因(yin)素會導(dao)致星活(huo)性(xing)？

A:長(chang)時(shi)間孵(fu)育(yu)、過(guo)量的(de)酶(mei)、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較小(xiao)的反(fan)應體系等因素都(dou)會導(dao)致星活(huo)性(xing)的產生。

Q:未經純化(hua)的(de)PCR產物直(zhi)接酶切要(yao)怎樣設定體(ti)系？

A:反(fan)應體系推薦由(you)這些內容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的(de)限制性(xing)內切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量根(gen)據(ju)PCR產物的(de)濃(nong)度(du)而定，只加入2 μl反(fan)應緩沖液的原因是PCR反(fan)應中存(cun)在(zai)對應的鹽(yan)離子(zi)和金屬離子(zi)，適(shi)當(dang)減少反(fan)應緩沖液的用量以(yi)保(bao)證(zheng)最(zui)終(zhong)反(fan)應體系中的環境適(shi)宜(yi)限制性(xing)內切酶(mei)發揮功能。

Q:限(xian)制性(xing)內切酶(mei)簡(jian)並性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點壹(yi)定(ding)是(shi)回文的嗎(ma)？

A:大(da)多數二型限制性(xing)內切酶(mei)的識(shi)別(bie)序(xu)列(lie)是(shi)回文的，而且(qie)是特(te)定的堿基(ji)序(xu)列(lie)。然而有些(xie)限(xian)制性(xing)內切酶(mei)具(ju)有簡(jian)並性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點，也就是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位(wei)點中(zhong)有(you)壹(yi)個或(huo)以(yi)上(shang)的堿基(ji)對是非特(te)異的(de)（例如：BsrfI識(shi)別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這(zhe)樣的(de)具(ju)有簡(jian)並性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點的(de)限(xian)制性(xing)內切酶(mei)，只要(yao)是符(fu)合(he)要(yao)求的(de)序列(lie)皆能被識(shi)別(bie)並且(qie)被正確地(di)切割(ge)（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩個並不(bu)是(shi)回文的，仍然能被BsrFI識(shi)別(bie)並且(qie)切割(ge)）。