多(duo)層細(xi)胞培養瓶與(yu)傳統(tong)的單層培養瓶相(xiang)比，能(neng)提供(gong)更(geng)大的(de)培養面(mian)積(ji)，它可以(yi)降低(di)培養瓶數(shu)量(liang)，減(jian)少(shao)實(shi)驗室(shi)的儲(chu)存(cun)空(kong)間和成本。此(ci)外，它還(hai)可(ke)以(yi)減(jian)少(shao)培養操作的頻(pin)率(lv)，提高培養效率(lv)。

操作流程(cheng)：

多層(ceng)細(xi)胞培養瓶的(de)操(cao)作流程(cheng)主(zhu)要(yao)包(bao)括以(yi)下幾個步(bu)驟(zhou)：

1. 細(xi)胞懸液(ye)混(hun)勻(yun)：根(gen)據實(shi)驗要(yao)求制備(bei)細(xi)胞懸液(ye)，並在(zai)培養基(ji)瓶、培養瓶或(huo)其(qi)他(ta)容器(qi)中(zhong)混(hun)勻(yun)。建議(yi)每層(ceng)的(de)工(gong)作容積(ji)為(wei)30-50 mL。

2. 接(jie)種(zhong)細(xi)胞懸液(ye)：使(shi)用(yong)移液(ye)管(guan)緊(jin)貼瓶壁(bi)緩(huan)慢(man)地(di)將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)到細(xi)胞培養瓶中(zhong)，註(zhu)意(yi)避(bi)免(mian)產生泡沫或氣(qi)泡(pao)。使(shi)用(yong)10 mL移液(ye)管(guan)可(ke)以(yi)伸到培養瓶底(di)部使培養基(ji)分(fen)散(san)開，而25 mL移液(ye)管(guan)則(ze)只能(neng)伸到NEST標誌的(de)地(di)方(fang)。

3. 平衡液(ye)體：將(jiang)培養瓶有NEST標誌的(de)壹(yi)側(ce)朝(chao)向自(zi)己，順(shun)時(shi)針(zhen)傾(qing)斜45度(du)左(zuo)右(you)放(fang)置壹段(duan)時(shi)間，使(shi)瓶中(zhong)各(ge)個隔(ge)層(ceng)的(de)液(ye)體達(da)到平衡。

4. 水(shui)平放(fang)置培養瓶：輕(qing)緩(huan)地(di)將(jiang)培養瓶水(shui)平放(fang)置於工(gong)作臺上(shang)，NEST標誌面(mian)朝(chao)上。

5. 晃(huang)動(dong)培養瓶：前後左右(you)輕(qing)輕晃(huang)動(dong)多層(ceng)瓶，使(shi)液(ye)體均勻(yun)分(fen)布(bu)在(zai)每層(ceng)生(sheng)長面(mian)上。註(zhu)意晃(huang)動(dong)要(yao)輕(qing)柔(rou)，防止(zhi)起(qi)泡沫和培養基(ji)滲漏(lou)到下層(ceng)。

6. 移除培養液(ye)：可(ke)以(yi)選(xuan)擇抽(chou)吸(xi)或(huo)傾(qing)倒(dao)培養基(ji)的方(fang)法(fa)去(qu)除培養基(ji)。抽吸(xi)時，將(jiang)多層瓶傾(qing)斜45度(du)，有NEST標記的壹(yi)面(mian)朝(chao)向自(zi)己，使(shi)用(yong)10 mL或(huo)2 mL移液(ye)管(guan)抽(chou)吸培養基(ji)。

7. 細(xi)胞的收集：用(yong)緩(huan)沖液(ye)清(qing)洗(xi)壹(yi)遍以(yi)去(qu)除殘(can)留(liu)的(de)血清(qing)，後(hou)加入(ru)消(xiao)化(hua)液(ye)（每層(ceng)大於(yu)5 mL），混(hun)勻(yun)。消(xiao)化(hua)大約2分(fen)鐘後，用(yong)消(xiao)化(hua)終止(zhi)液(ye)中(zhong)和(he)消(xiao)化(hua)液(ye)。采用(yong)移液(ye)管(guan)抽(chou)吸法(fa)或傾(qing)倒(dao)法(fa)將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)置(zhi)於(yu)離(li)心管(guan)等(deng)容器(qi)中(zhong)。

8. 沖洗(xi)培養瓶：用(yong)壹(yi)定(ding)量(liang)的緩沖液(ye)沖洗(xi)多(duo)層瓶三(san)次(ci)，將(jiang)沖洗(xi)液(ye)同(tong)時置於離(li)心管(guan)中(zhong)，混(hun)勻(yun)計(ji)數(shu)或(huo)者(zhe)傳(chuan)代接(jie)種(zhong)。

9. 放(fang)置於CO2培養箱：最後，將(jiang)培養瓶水(shui)平輕(qing)緩轉移放置(zhi)於(yu)CO2培養箱中(zhong)。

使用(yong)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：