免疫熒光(guang)技(ji)術(shu)簡介(jie)

概(gai)述(shu)：

免疫熒光(guang)技(ji)術(shu)（Immunofluorescence technique ）又(you)稱(cheng)熒光(guang)抗(kang)體(ti)技(ji)術(shu)，它(ta)是(shi)根(gen)據(ju)抗(kang)原抗(kang)體(ti)反應(ying)的(de)原理，先(xian)將已(yi)知的(de)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)標記(ji)上(shang)熒光(guang)基(ji)團(tuan)，再(zai)用這種(zhong)熒光(guang)抗(kang)體(ti)（或抗(kang)原）作為探(tan)針(zhen)檢(jian)查細(xi)胞(bao)或(huo)組織內的(de)相應(ying)抗(kang)原（或(huo)抗(kang)體(ti)）。利用熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡可(ke)以(yi)看(kan)見熒光(guang)所(suo)在的(de)細(xi)胞(bao)或(huo)組織，從而(er)確(que)定抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)性(xing)質和定(ding)位(wei)。

目(mu)的(de)：

測定(ding)內分泌(mi)激素(su)、蛋(dan)白質、多肽(tai)、核(he)酸(suan)、神經(jing)遞(di)質、受體(ti)、細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)、細(xi)胞(bao)表(biao)面抗(kang)原、腫(zhong)瘤(liu)標誌物(wu)、血藥濃度等(deng)各種生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)物(wu)質。

步驟：

1、細(xi)胞(bao)準(zhun)備；

2、固定。根據需要(yao)選(xuan)擇適當(dang)的(de)固定劑固定細(xi)胞(bao)，固定完畢(bi)後(hou)的(de)細(xi)胞(bao)可(ke)置於含(han)疊(die)氮納(na)的(de)PBS中4℃保存3個月；

3、通透(tou)。使(shi)用交(jiao)聯(lian)劑（如多聚(ju)甲醛）固定後(hou)的(de)細(xi)胞(bao)，壹(yi)般需要(yao)在(zai)加(jia)入抗(kang)體(ti)孵(fu)育(yu)前，對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)通透(tou)處(chu)理，以保證抗(kang)體(ti)能夠(gou)到達(da)抗(kang)原部位(wei)。選擇通透(tou)劑應(ying)充分(fen)考慮(lv)抗(kang)原蛋(dan)白的(de)性(xing)質。

4、封閉(bi)。使用封閉(bi)液(ye)對細(xi)胞(bao)進行(xing)封閉(bi)。

5、壹(yi)抗(kang)結(jie)合(he)。室(shi)溫(wen)孵(fu)育(yu)1h或者(zhe)4℃過夜。

6、二抗(kang)結(jie)合(he)。間接免疫熒光(guang)需要(yao)使(shi)用二抗(kang)。

7、封片，熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡檢(jian)查

免疫熒光(guang)技(ji)術(shu)用到的(de)實(shi)驗室(shi)儀(yi)器(qi)和設備：

免疫熒光(guang)技(ji)術(shu)是(shi)壹(yi)種結(jie)合(he)了免疫化(hua)學和(he)熒光(guang)標記(ji)技(ji)術(shu)的(de)方法(fa)，用於在(zai)細(xi)胞(bao)或(huo)組織樣(yang)本(ben)中檢(jian)測特定的(de)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)。進行(xing)免疫熒光(guang)實(shi)驗通常(chang)需要(yao)以(yi)下(xia)實(shi)驗室(shi)儀(yi)器(qi)和設備：

熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡：用於觀(guan)察(cha)和拍攝(she)熒光(guang)標記(ji)的(de)樣(yang)本(ben)。

載(zai)玻(bo)片(pian)和(he)蓋(gai)玻(bo)片(pian)：用於制(zhi)作樣(yang)本(ben)切(qie)片(pian)。

顯微(wei)鏡玻(bo)片(pian)加(jia)熱器：用於固定樣(yang)本(ben)。

孵(fu)育(yu)箱：用於在(zai)特定溫(wen)度下(xia)孵(fu)育(yu)樣(yang)本(ben)和試劑。

離心(xin)機(ji)：用於離心(xin)樣(yang)本(ben)，如分離細(xi)胞(bao)或(huo)去除多余抗(kang)體(ti)。

移液(ye)器：用於準(zhun)確(que)量(liang)取(qu)和(he)轉移液(ye)體。

吸(xi)頭(tou)：與(yu)移液(ye)器配合(he)使(shi)用，用於吸(xi)取(qu)和(he)分配液(ye)體。

洗(xi)板(ban)機(ji)：用於自動(dong)化(hua)洗(xi)滌步驟，減少交(jiao)叉(cha)汙染。

濕(shi)盒(he)：用於在(zai)暗(an)環境(jing)中孵(fu)育(yu)樣(yang)本(ben)。

顯微(wei)鏡載(zai)物(wu)臺加(jia)熱器：用於維(wei)持樣(yang)本(ben)溫度，尤(you)其是(shi)在(zai)觀(guan)察活(huo)細(xi)胞(bao)時(shi)。

激光(guang)掃描(miao)共聚(ju)焦顯(xian)微(wei)鏡（可(ke)選(xuan)）：用於更(geng)高(gao)級(ji)的(de)熒光(guang)成(cheng)像(xiang)。

pH計(ji)：用於調整(zheng)和(he)監(jian)測溶液(ye)的(de)pH值(zhi)。

去離子(zi)水(shui)系統(tong)：用於制(zhi)備(bei)高純度的(de)去離子(zi)水(shui)。

濾光(guang)片：用於選(xuan)擇特定波長的(de)光。

熒光(guang)染料：用於標記(ji)抗(kang)體(ti)或抗(kang)原。

抗(kang)體(ti)和抗(kang)原儲(chu)存(cun)設備：如冰箱和(he)-80°C超(chao)低溫冰(bing)箱。

生(sheng)物(wu)安全櫃：用於在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)操作樣(yang)本(ben)。

熱封膜機(ji)：用於封膜顯(xian)微(wei)鏡玻(bo)片(pian)。

洗(xi)滌瓶和容器(qi)：用於存(cun)儲(chu)和洗(xi)滌試劑及樣(yang)本(ben)。

顯微(wei)鏡攝(she)像(xiang)頭(tou)：用於捕(bu)捉(zhuo)顯微(wei)鏡下(xia)的(de)圖像。

圖像分析軟(ruan)件(jian)：用於分(fen)析(xi)顯微(wei)鏡拍(pai)攝(she)的(de)圖像。