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更新時(shi)間:2023-02-16
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購(gou)買細(xi)胞(bao)收(shou)到(dao)細胞(bao)前(qian),應(ying)做(zuo)哪(na)些(xie)準(zhun)備工作?
購買(mai)細(xi)胞(bao)應(ying)具(ju)有(you)壹定(ding)細胞(bao)培(pei)養(yang)知識(shi)與(yu)經(jing)驗(yan),並(bing)具備基(ji)本(ben)實(shi)驗(yan)設備,如(ru)細胞(bao)培(pei)養(yang)實(shi)驗(yan)室、超凈工(gong)作臺、CO2培(pei)養(yang)箱(xiang),倒(dao)置顯(xian)微鏡等(deng);還應(ying)準(zhun)備好(hao)相應(ying)的(de)細(xi)胞(bao)無(wu)菌培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)、雙(shuang)抗、細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)、培養(yang)板(ban)、移液管等(deng)。
購(gou)買(mai)的細胞(bao)收(shou)到(dao)細胞(bao)後,應(ying)該(gai)怎麽(me)操作?
1. 觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao),培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)。若(ruo)有,請(qing)及(ji)時(shi)與技術支(zhi)持(chi)聯系(xi);
2. 用(yong)75%酒精擦(ca)拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian),顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題(ti),部分(fen)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)會(hui)有(you)少量(liang)從(cong)瓶(ping)壁脫(tuo)落(luo),將細(xi)胞(bao)置於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)靜置培(pei)養(yang),隔(ge)天(tian)再取(qu)出進行觀(guan)察;
3. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書,了解細(xi)胞(bao)相關信息,如(ru)細胞(bao)形(xing)態(tai)、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例、所(suo)需細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng);
4. 可(ke)將培(pei)養(yang)瓶(ping)內(nei)多(duo)余(yu)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)轉(zhuan)移至50ml無(wu)菌離(li)心(xin)管中,備用;細(xi)胞(bao)傳(chuan)代時,可(ke)以將該(gai)培養(yang)基(ji)按照壹定(ding)比例和(he)自備的培(pei)養(yang)基(ji)混合使(shi)用,讓(rang)細胞(bao)逐漸適應(ying)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian);
5. 確(que)認(ren)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)後,應(ying)及(ji)時(shi)將細(xi)胞(bao)凍存(cun),再進行後續(xu)的實驗(yan),避免後期實(shi)驗失(shi)誤可能(neng)發(fa)生細(xi)胞(bao)汙染或(huo)死亡(wang)而(er)導(dao)致的(de)細胞(bao)丟(diu)失;
6. 建(jian)議(yi)收到細胞(bao)後前(qian)3天(tian),100X、200X、400X各拍(pai)3-5張細胞(bao)照(zhao)片(pian),記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai),便(bian)於(yu)和(he)廠家技術支(zhi)持(chi)溝通(tong)交(jiao)流。
細(xi)胞(bao)發(fa)貨標(biao)準(zhun)是(shi)什麽?
細(xi)胞(bao)發(fa)貨時(shi),保(bao)證(zheng)細(xi)胞(bao)處於(yu)生(sheng)長對(dui)數(shu)期;貼壁(bi)細(xi)胞(bao)達(da)到(dao)75%以上匯合度(du),約5×10^5cells/T25細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping);傳(chuan)代次數(shu)5代以內(nei);凍存(cun)細胞(bao)發(fa)2個凍存(cun)管;無微生物汙染。
細(xi)胞(bao)壹般是(shi)以什麽形(xing)式(shi)運(yun)輸(shu)?
細胞(bao)通(tong)常(chang)用T25細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)培養(yang),發(fa)貨時(shi)用(yong)相應(ying)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)灌滿細(xi)胞(bao)瓶(ping),密封(feng)瓶(ping)口後放(fang)在包裝盒(he)內(nei),以快(kuai)遞的方(fang)式發(fa)送給客(ke)戶(hu)。天(tian)氣變冷(leng),溫(wen)度(du)低(di)於(yu)4℃時(shi),以凍存(cun)細胞(bao),幹(gan)冰(bing)運(yun)輸(shu)的方(fang)式發(fa)貨。
細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong),是(shi)否可以更換培(pei)養(yang)基(ji)?
不建(jian)議(yi)替換(huan)。每(mei)株細(xi)胞(bao)均(jun)有(you)其特定(ding)使(shi)用且(qie)已適應(ying)的(de)培(pei)養(yang)基(ji),而(er)且(qie)經過壹定(ding)時間馴(xun)化(hua)後,若(ruo)驟然(ran)改變培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian),細(xi)胞(bao)有(you)可(ke)能(neng)出現不適應(ying),表(biao)現出生長(chang)緩慢、顆粒(li)增多(duo)、死(si)細(xi)胞(bao)出現,造成細胞(bao)無(wu)法(fa)存活(huo);也(ye)有些(xie)細(xi)胞(bao)在(zai)更換培(pei)養(yang)基(ji)後也(ye)能(neng)正(zheng)常(chang)的(de)生長,細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)也(ye)能(neng)維(wei)持(chi),但(dan)問題(ti)會(hui)出現在凍存(cun)後期的(de)復(fu)蘇過(guo)程(cheng),有可(ke)能(neng)細(xi)胞(bao)沒(mei)法(fa)復(fu)蘇,所(suo)以不建(jian)議(yi)隨(sui)便(bian)更換培(pei)養(yang)基(ji)。
購買細(xi)胞(bao)後如(ru)何選擇細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)?
壹般,生(sheng)長(chang)速(su)度(du)慢的(de)細胞(bao)如(ru)果想(xiang)要更漂亮的(de)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai),那麽采(cai)用(yong)塑(su)料(liao)瓶(ping)會比玻璃(li)瓶(ping)的效(xiao)果(guo)好(hao);生(sheng)長(chang)速(su)度(du)快(kuai)的細胞(bao),用(yong)玻(bo)璃(li)瓶(ping)培養(yang)的(de)效(xiao)果(guo)會(hui)更好(hao)。因此,對(dui)於(yu)同(tong)壹種細胞(bao),在(zai)其(qi)生長速(su)度(du)慢的(de)時候(比如(ru)細胞(bao)剛(gang)復(fu)蘇時(shi)或(huo)者(zhe)原代培養(yang)),塑(su)料(liao)瓶(ping)會好(hao)壹點;而(er)在(zai)其(qi)生(sheng)長(chang)旺盛的時(shi)候(hou),玻璃(li)瓶(ping)則相對(dui)會(hui)好(hao)壹點。
蘇州阿爾法(fa)提(ti)供(gong)CHO細胞(bao)、CHO-S細(xi)胞(bao)、HEK、Vero細(xi)胞(bao)、幹(gan)細(xi)胞(bao)、293T等(deng)百余種細胞(bao)系(xi)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)、胎(tai)牛血清(qing)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)套裝、T25細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)、細胞(bao)搖(yao)瓶(ping)等(deng)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)試(shi)劑(ji)和(he)耗(hao)材,同(tong)時提供(gong)細胞(bao)培(pei)養(yang)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)、生(sheng)物發(fa)酵(jiao)罐(guan)、二(er)氧(yang)化(hua)碳振蕩培養(yang)箱(xiang)、PCR儀(yi)、離(li)心(xin)機(ji)、分(fen)光(guang)光度(du)計(ji)、流式(shi)細胞(bao)分(fen)析儀、細胞(bao)計(ji)數(shu)儀(yi)、細(xi)胞(bao)顯(xian)微(wei)成像(xiang)系(xi)統(tong)和(he)用於(yu)葡(pu)萄糖(tang)-乳酸(suan)分(fen)析的EKF Biosen C-Line 乳酸(suan)分(fen)析儀等(deng)。
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