外(wai)泌(mi)體制造(zao)需(xu)要哪(na)些(xie)實驗室設備

 外(wai)泌(mi)體是(shi)蛋白質、脂(zhi)質和核酸的(de)天然載(zai)體，在(zai)細胞(bao)間通訊中(zhong)起著至關(guan)重要(yao)的(de)作用(yong)。外(wai)泌(mi)體包含各(ge)種(zhong)膜蛋白，例(li)如內體相(xiang)關(guan)蛋(dan)白（Alix、Tsg101 和 Rab 蛋白）、四(si)跨膜蛋白（CD63、CD81、CD82、CD53 和 CD37）和脂筏相(xiang)關(guan)蛋(dan)白（糖(tang)基磷(lin)脂酰(xian)肌醇和 flotillin）。隨著近年(nian)來(lai)生(sheng)物技(ji)術(shu)、實驗室設備的(de)不(bu)斷發展，外(wai)泌(mi)體有(you)著廣泛的(de)應(ying)用(yong)前(qian)景(jing)，包括藥物發(fa)現、配(pei)體篩選(xuan)和靶(ba)向(xiang)藥物遞(di)送(song)。

  進(jin)而(er)即用(yong)型(xing)、高質量(liang)的(de)功(gong)能性(xing)外(wai)泌(mi)體的(de)需(xu)求也(ye)越來(lai)越(yue)顯(xian)明(ming)，這(zhe)種(zhong)工業(ye)外(wai)泌(mi)體生產(chan)需(xu)要通(tong)過(guo)大(da)規(gui)模外(wai)泌(mi)體制備和純化(hua)來(lai)實(shi)現。

外(wai)泌(mi)體制備過(guo)程(cheng)主要分(fen)為(wei)以(yi)下(xia)幾(ji)個關(guan)鍵(jian)步驟：

1.上(shang)遊生產(chan) —— 用(yong)於(yu)外(wai)泌(mi)體制造(zao)的(de)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)培(pei)養和擴增(zeng)。選(xuan)擇特定(ding)的(de)細(xi)胞(bao)系(xi)它進(jin)行細(xi)胞(bao)的(de)傳(chuan)代培(pei)養和培(pei)養擴增(zeng)才能產(chan)生大(da)量(liang)用(yong)於(yu)外(wai)泌(mi)體生產(chan)的(de)細(xi)胞(bao)。通常(chang)，規(gui)模化擴(kuo)培(pei)，可以使用(yong)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)進行分(fen)批(pi)補料(liao)培(pei)養，細胞(bao)培(pei)養時采(cai)用(yong)無血(xue)清(qing)培(pei)養基可用(yong)於(yu)減(jian)少(shao)汙(wu)染(ran)並(bing)有(you)助於(yu)外(wai)泌(mi)體純化(hua)。

2.外(wai)泌(mi)體分離和純化(hua)——當(dang)前外(wai)泌(mi)體的(de)分(fen)離方法(fa)主要包括：差(cha)速離心法(fa)、TFF切向(xiang)流(liu)過(guo)濾(lv)法(fa)、密度(du)梯(ti)度(du)離心、空間排(pai)阻色(se)譜(pu)法(fa)(SEC)、聚(ju)合(he)物沈(chen)澱(dian)和免(mian)疫(yi)親和等方(fang)法(fa)。為(wei)了提(ti)高(gao)外(wai)泌(mi)體的(de)濃(nong)度(du)和質量(liang)，超(chao)速離心、微(wei)濾(lv)法(fa)、空間排(pai)阻色(se)譜(pu) (SEC)法(fa) 和免(mian)疫(yi)親和等技(ji)術(shu)多用(yong)於(yu)外(wai)泌(mi)體純化(hua)。

3.外(wai)泌(mi)體分析——為(wei)了清(qing)楚了解(jie)您的(de)外(wai)泌(mi)體質量(liang)、大(da)小(xiao)、形(xing)態、特點(dian)還(hai)需(xu)要對(dui)外(wai)泌(mi)體進行進(jin)壹(yi)步分析研(yan)究(jiu)，在(zai)外(wai)泌(mi)體表征(zheng)壹(yi)般會使用(yong)流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)(FACS)多色(se)分(fen)析、凝(ning)膠電(dian)泳western blot（WB）、ELISA等標(biao)記(ji)分(fen)析和組(zu)織學(xue)分(fen)析。外(wai)泌(mi)體質量(liang)大(da)小(xiao)、形(xing)態分析主要使用(yong)的(de)實(shi)驗設(she)備包括、納米粒度(du)儀(yi)、透(tou)射電(dian)子(zi)顯(xian)微(wei)鏡 (TEM)、納米粒子(zi)跟蹤(zong)分(fen)析儀(yi) (NTA)等。

4.凍(dong)幹(gan)外(wai)泌(mi)體—— 雖然(ran)實(shi)驗室中(zhong)常規(gui)的(de)外(wai)泌(mi)體存儲條(tiao)件(jian)為(wei)4℃、-20℃、-80℃。 但外(wai)泌(mi)體存儲在(zai)-80°C將不(bu)利於(yu)其(qi)運輸及(ji)應用(yong)，而(er)采(cai)用(yong)外(wai)泌(mi)體凍(dong)幹(gan)技(ji)術(shu)不僅(jin)可以在(zai)室溫條件下(xia)穩(wen)定(ding)保(bao)存還(hai)可以(yi)改善藥物遞(di)送(song)載(zai)體脂質體的(de)長期(qi)穩定(ding)性(xing)。

外(wai)泌(mi)體制備過(guo)程(cheng)中(zhong)常用(yong)的(de)實(shi)驗室設備：

    傳統的(de)外(wai)泌(mi)體產生(sheng)的(de)細(xi)胞(bao)作為(wei)靜(jing)態(tai)系(xi)統在(zai)燒瓶(ping)中(zhong)培(pei)養，這限(xian)制了培(pei)養環境(jing)參(can)數(shu)的(de)控(kong)制和進壹(yi)步提(ti)高(gao)產(chan)量(liang)。所(suo)以大(da)規(gui)模的(de)外(wai)泌(mi)體制備或者外(wai)泌(mi)體工業(ye)化(hua)生產常(chang)使用(yong)動態(tai)培(pei)養系(xi)統，比(bi)如：會使用(yong)搖(yao)瓶(ping)、旋轉瓶(ping)、滾(gun)瓶(ping)和生物反(fan)應(ying)器(qi)作為(wei)可(ke)選(xuan)的(de)外(wai)泌(mi)體制造(zao)設(she)備。

    由(you)於(yu)在(zai)生物反(fan)應(ying)器(qi)中(zhong)配(pei)置了穩(wen)定(ding)可(ke)靠(kao)的(de)動態(tai)監(jian)控系(xi)統，可(ke)以(yi)實時(shi)控制 CO2、O2、pH 值等(deng)培(pei)養環境(jing). 不僅在(zai)培(pei)養規模上有(you)所(suo)擴展，而(er)且(qie)細(xi)胞(bao)培(pei)養環境(jing)也(ye)得(de)到(dao)了較(jiao)大(da)的(de)改善。尤其(qi)是(shi)微(wei)載體生物反(fan)應(ying)器(qi)采用(yong)了提(ti)升(sheng)式(shi)攪(jiao)拌槳，較大(da)程(cheng)度(du)地降低了細(xi)胞(bao)剪切力，溫(wen)控(kong)系(xi)統采(cai)用(yong)夾(jia)套和罐內雙溫度(du)PID控(kong)制(zhi)控(kong)溫(wen)精準度(du)可(ke)達0.1°C。

    蘇州(zhou)阿(e)爾(er)法(fa)生物提(ti)供(gong)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)廣泛應用(yong)於(yu)制(zhi)備外(wai)泌(mi)體的(de)細(xi)胞(bao)規模化擴(kuo)培(pei)等外(wai)泌(mi)體制造(zao)的(de)上(shang)遊生產(chan)。同時(shi)提(ti)供(gong)，振(zhen)蕩培(pei)養箱、高(gao)速離心機(ji)、低(di)速離心機(ji)、電(dian)泳儀、電(dian)泳槽、紫外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計、流(liu)式(shi)細胞(bao)儀、納米粒度(du)儀(yi)等(deng)實(shi)驗室設備廣泛應用(yong)於(yu)外(wai)泌(mi)體制備的(de)各(ge)個階(jie)段(duan)